{"id":"CONICETDig_9fef348015523a5bf00e696b21fada38","dc:title":"Nanoanticuerpos VHH mono y multivalentes contra el virus de Influenza A de aplicaci\u00f3n profil\u00e1ctica y terap\u00e9utica","dc:creator":"Puntel, Mariana","dc:date":"2024","dc:description":["El virus de la influenza tipo A contin\u00faa siendo responsable de brotes y epidemias, adem\u00e1s de pandemias con graves consecuencias para la salud humana. Luego de la Pandemia del a\u00f1o 2009, los virus H1N1 se establecieron en la poblaci\u00f3n humana como virus estacionales junto a los virus H3N2, y han representado el subtipo prevalente. La hemaglutinina (HA) es el ant\u00edgeno inmunodominante que contiene en su dominio globular (HA1) el sitio de uni\u00f3n al receptor celular (RBS) que induce anticuerpos neutralizantes asociados con la protecci\u00f3n contra la infecci\u00f3n. En el presente trabajo se caracterizaron nanoanticuerpos (VHHs) derivados de llama inmune espec\u00edficos para el virus de la influenza tipo A, con el fin de investigar su potencial como herramienta terap\u00e9utica. Se seleccionaron 10 VHHs espec\u00edficos contra H1N1. Dos VHHs (B33 y D81) mostraron uni\u00f3n espec\u00edfica contra los subtipos H1, H5 y H3, y reconocieron ep\u00edtopes lineales. B33 se uni\u00f3 cerca del N-terminal del tallo de HA (HA2) y D81 se uni\u00f3 cerca del C-terminal de HA1. Debido a su amplio rango de reconocimiento, los VHH B33 y D81 podr\u00edan considerarse candidatos para perfeccionar las herramientas de diagn\u00f3stico. Cinco VHH neutralizantes (A5, D81, D91, E13 y G41) reconocieron ep\u00edtopes ubicados en HA1. E13 y G41 reconocieron ep\u00edtopes conformacionales en HA1, y mostraron capacidad neutralizante contra otros 6 virus de origen humano, aviar y porcino, aislados entre los a\u00f1os 1934 y 2018. Este \u00faltimo dato sugiriere que el ep\u00edtope involucrado en el reconocimiento ser\u00eda altamente conservado, requisito necesario para la elecci\u00f3n de una herramienta terap\u00e9utica de aplicaci\u00f3n universal. En el modelo rat\u00f3n, VHH E13 mostro efecto profil\u00e1ctico esterilizante contra los virus H1N1 (hu\/Arg\/09, hu\/Arg\/09 ma, y hu\/PR8\/34) en todo el rango de dosis administradas (5 mg\/kg a 0,05 mg\/kg), y no fue posible detectar virus en los pulmones de los animales tratados el d\u00eda 4 despu\u00e9s de la exposici\u00f3n. Por otro lado, G41 mostr\u00f3 un efecto profil\u00e1ctico espec\u00edfico frente a la cepa hu\/Arg\/09 (dosis 5mg\/Kg) y una protecci\u00f3n parcial frente a la misma adaptada al rat\u00f3n y frente al hu\/PR8\/34, logrando en el 100% de los animales el mantenimiento del peso a lo largo del ensayo. Se destaca la capacidad de E13 para controlar la infecci\u00f3n por H1N1 en ratones, respaldando su desarrollo como un inmuno-terap\u00e9utico para la profilaxis y el tratamiento del virus de la influenza. Por otro lado, se encontraron eficacias profil\u00e1cticas similares para los VHHs E13 y G41 expresados en P. Pastoris, lo cual evidencia la factibilidad de la elaboraci\u00f3n de estos VHHs en un sistema de expresi\u00f3n frecuentemente utilizado por la industria farmac\u00e9utica. A su vez, el estudio de la respuesta inmune humoral, vi\u00e9ndose disminuida en los animales que reciben tratamiento espec\u00edfico con E13, o con G41, demostrando que la inmunidad pasiva desata un menor compromiso de la respuesta inmune end\u00f3gena en los individuos tratados. Adicionalmente, no se observ\u00f3 una respuesta espec\u00edfica contra los VHHs suministrados lo que agrega un dato de seguridad de los VHHs terap\u00e9uticos. Por otro lado, a trav\u00e9s de un nuevo biopaneo, se realiz\u00f3 la b\u00fasqueda de nanoanticuerpos espec\u00edficos contra el virus H3N2 hu\/Perth\/09, utilizando la t\u00e9cnica display en fagos. Para la selecci\u00f3n de los VHHs se utiliz\u00f3 el virus H3N2 hu\/Perth\/09 producido en c\u00e9lulas MDCK y purificado con una columna de intercambio i\u00f3nico Sartobind Q lo que favoreci\u00f3 la eliminaci\u00f3n de restos celulares . De los 26 clones obtenidos fue posible obtener las secuencias de 14 VHHs, y se evidenciaron al menos 8 clones disponibles para su posterior caracterizaci\u00f3n. A su vez, en el presente trabajo se presenta la puesta a punto del modelo cobayo de infecci\u00f3n con virus influenza, el cual no requiere de la adaptaci\u00f3n de los virus de origen humano, con potencial aplicaci\u00f3n a la eficacia tanto terap\u00e9utica como profil\u00e1ctica de los VHHs, como as\u00ed tambi\u00e9n el estudio del bloqueo de la transmisi\u00f3n viral por contacto. De los resultados anteriores se desprende que la administraci\u00f3n local de VHHs neutralizantes, E13 y G41 otorgan protecci\u00f3n total frente a la infecci\u00f3n viral con virus influenza H1N1, y respalda su desarrollo posterior como componente activo de inmunoterap\u00e9uticos y su transferencia a la cl\u00ednica m\u00e9dica."],"dc:format":["application\/vnd.openxmlformats-officedocument.spreadsheetml.sheet"],"dc:language":["spa"],"dc:type":"dataset","dc:rights":["info:eu-repo\/semantics\/restrictedAccess","Datos sujetos al derecho de propiedad intelectual"],"dc:relation":["info:eu-repo\/grantAgreement\/Ministerio de Ciencia, Tecnolog\u00eda e Innovaci\u00f3n Productiva. Agencia Nacional de Promoci\u00f3n Cient\u00edfica y Tecnol\u00f3gica. Fondo para la Investigaci\u00f3n Cient\u00edfica y Tecnol\u00f3gica\/1437-2014-PICT","info:eu-repo\/grantAgreement\/\/1437-2014-PICT"],"dc:identifier":"https:\/\/repositoriosdigitales.mincyt.gob.ar\/vufind\/Record\/CONICETDig_9fef348015523a5bf00e696b21fada38"}